！！！特别提示：本試劑盒廣泛征求用(yòng)戶λ₽ $意見(jiàn)後根據使用(yòng)關切進行(xíng)了(le)合理₩♥¶(lǐ)配置，克服了(le)一(yī)般試劑盒液體(tǐ)活₹ε化(huà)HRP不(bù)穩定問(wèn)  σ題，凍幹HRP不(bù)易溶解和(hé)不(bù)易進行(xín $♦g)微(wēi)量标記等問(wèn)題，使标‌'記更加方便易操作(zuò)，且标記量不(bù)限下(xià)線，讓實驗"←₽≈變得(de)簡單。

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        &nbs¥<πp;      δ≈÷±;      &​£nbsp; HRP快(kuài)速标記試劑盒 産品使用(yòng)說(shuō)明(míng)書(shū)

在您使用(yòng)本産品前請(qǐng)認真閱讀(dú)說(shuō)明(míng)書≤₹≈↑(shū)，這(zhè)對(duì)您順利完成實驗很(≠↔★≠hěn)有(yǒu)幫助。

産品貨号：6210-1MGX5

産品名稱：HRP快(kuài)速标記試劑盒（每次标記量可(kě)以低(dī)到(dào)0​≈βγ.1mg）

原理(lǐ)與應用(yòng)：高(gāo)碘酸鈉氧化(huà)法活化(huà)辣根過氧化(huà)物(wù)酶（HRP）的(de)糖基，經過活化(huà)的(de)HRP帶有(yǒu)醛基可(kě)以與待标記物(wù)的(de)遊離(lí)氨基結合，發生(s"Ω₩∑hēng)希夫堿反應（Schiff's base reaction←♥）。本試劑盒适用(yòng)于帶有(yǒu)遊離(lí)氨基的(de)物(wù)質的(d±₹e)标記，比如(rú)：帶有(yǒu)遊離(lí)氨基（伯胺）的(de)抗體(tǐ)、蛋白(bái)或者小(xiǎo)分(fēn)子(zǐ)化(huà)合物 ®§ε(wù)。本試劑盒采用(yòng)特有(yǒu)穩定技(j₽✘πì)術(shù)，活化(huà)HRP保存在液體(tǐ)中，吸取方便，可(kě)以較小(xiǎo)标記量（可(kě)δ ♦∏以小(xiǎo)到(dào)100UG），讓您的(de)标α₹記工(gōng)作(zuò)更易把控和(hé)操作(zuò)！

試劑盒組成：

操作(zuò)步驟：

1.  首先去(qù)除待标記抗體(tǐ)或蛋白(bái)§₽•中的(de)疊氮鈉、以及含有(yǒu)氨基的(d←≠↑Ωe)緩沖成分(fēn)物(wù)質，比如(rú)甘氨酸、Tris 等，還(hái)有(yǒu)EDTA等物(wù)質，可(kě)采用(yòng)透析和(hé)超濾的(de)辦法置換緩沖液，以去(qù)除幹擾物(→✔✘wù)質達到(dào)較好(hǎo)标記效果！透析或超濾緩沖液盡量選擇0.01M CB,PH:9.6緩沖液(說(shuō)明(míng)←α書(shū)附件(jiàn)有(yǒu)經驗配方無€>φ需調整PH），若實驗室沒有(yǒu)碳酸鹽試劑再采用(yòng)0.01M PBS（PH:7.0-σβ7.4均可(kě)）透析或超濾置換緩沖液，結束後調整抗體(tǐ)或蛋白(bái)的(de)濃度到(dào)2MG/ML。如(rú)果抗體(tǐ)和(hé)蛋白(bái)不(bù)含上(shà✔÷"ng)述這(zhè)些(xiē)幹擾物(wù)質可(kě)以直接用(yò♣≠‌ng)上(shàng)述PBS或CB緩沖液調整濃度到(dào)2MG/ML備用(yòng)。

2.  從(cóng)4℃取出HRP标記試劑盒，使各組分(fēn)充分(fēn)混勻。

3. 取500ul抗體(tǐ)或蛋白(bái)（約1mg™$σ），加入100ul預活化(huà)HRP(1mg)液體(tǐ)中，用(yòng)移液槍反複吹打幾次混勻，混勻後加入HRP标記啓動液108ul（加入啓動液量依&₽據：每10ul蛋白(bái)和(hé)HRP混合液加1.8ul啓動液）繼續←↓ ✘混勻數(shù)次，避免産生(shēng)氣泡。然後避光(guāng)30℃-37℃溫箱偶聯反應2-3小(xiǎo)時(shí)，若遇快(kuài)要(yào)下(xià)班也(yě)↔♣可(kě)放(fàng)4℃反應24小(xiǎo)時(shí)左右（此法效果一(y↔‌ī)樣或者更好(hǎo)不(bù)必擔心）。>≈✘♠

4. 偶聯結束将反應終止液粉管中加入1mL去(qù)離(lí)子(zǐ)水(shuǐ)混勻，取50ul加入3所述反應液中（加入終止液量依據：每1mg HRP加入終止液50ul），充分(fēn)混勻，室溫放(fàng)置1 小(xiǎo)時(shí)或者4℃ 2小(xiǎo)時(shí)。

5. 終止完成後，可(kě)直接加入等體(tǐ)積的(de)标記物(wù)保存液，充分(fēn)混勻，置于-20℃保存。如(rú)果想更上(shàng)長(cháng)期的(γσ‍de)保存建議(yì)先用(yòng)0.067M PBS  PH:7.0（說(shuō)明(míng∏§¶)書(shū)附件(jiàn)有(yǒu)經驗&☆≈€配方）透析或超濾置換緩沖液後再加标記物(wù)保存液α>σ。這(zhè)樣可(kě)以保存3年(nián)左右甚至更長(cháng∑ )。

注意事(shì)項：

1、待标記物(wù)緩沖液成分(fēn)過于複雜(zá)以及含有(yǒu)氨基小(∞♥→xiǎo)分(fēn)子(zǐ)和(hé)NAN3的(de)初始緩沖液必須透析或超濾置換掉，請(qǐng)采用(yòng)0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可(kě)）或0.01M CB,PH:9.6緩沖液均可(kě)。

2、如(rú)果待标記物(wù)不(bù)是(shì)抗體(tǐ)↔ ↕π是(shì)其它蛋白(bái)，那(nà)麽請(qǐng)根據分(fēn)子(zǐ)量參考蛋♥∏白(bái)和(hé)酶用(yòng)量：若分(fēn)子(zǐ)量在40KD以上(shàng)建議(yì)1mg蛋白(bái✔≈₽λ)使用(yòng)1mg HRP；如(rú)果分(fēn)子(zǐ)量在'→30KD左右，建議(yì)1mg蛋白(bái)使用(yòng)1.3mg HRP；如(rú)果分♣≥(fēn)子(zǐ)量在20KD左右，建議(yì)1mg蛋白(bái)使用( •yòng)2mg HRP；如(rú)果分(fēn)↔≤子(zǐ)量在10KD左右，建議(yì)1mg蛋白(b•¶ái)使用(yòng)4mg HRP；此時(shí)啓動液和δ$↔(hé)終止液請(qǐng)按步驟3和(hé)4描述标準适量加入；如(rú)果<‌↕®标記量為(wèi)小(xiǎo)于1mg的(d♠✘₩e)抗體(tǐ)或蛋白(bái)（可(kě)以小(xiǎo)到(dào)0.×δα1mg），HRP和(hé)其它試劑加入量按比例折算(suàn)即可(kě)。

3、小(xiǎo)分(fēn)子(zǐ)藥物(wù)不(bù)建議(yì)直接标記♥π≥♠HRP，因為(wèi)HRP的(de)結構不(bù)能(néng)結合足夠的(de)藥∑€ 物(wù)會(huì)造成效價偏低(dī)，這(zhè)種情況建≈ε議(yì)先偶聯BSA增加小(xiǎo)分(fēn)子(zǐ)偶聯量再進行(xíng)HRP标記±☆，這(zhè)樣效果會(huì)非常好(hǎo)。

4、如(rú)果待标記物(wù)含有(yǒu)δ 其它蛋白(bái)需要(yào)把無關蛋白(bái☆∏)同樣計(jì)算(suàn)進去(qù)，盡快(kuài)如(rú)此也(yě)請(qǐ×↕±ng)您慎重選擇這(zhè)樣的(de)樣品αΩ¶進行(xíng)标記。

5、本試劑盒保存4℃可(kě)以保證1年(nián)內(nèi)開(kāi)啓有(yǒu)效，活化(huà✘φα§)HRP開(kāi)啓後小(xiǎo)心取用(yòng)切±§↑→勿污染堿性物(wù)質。

6、終止液幹粉一(yī)共5支，原則上(shàng)每一(yī)支配好(hǎo)後僅限一(yī)次性使用(yòng)α★，因此您可(kě)以根據您的(de)實驗總量合理(lǐ)配制(zhì)使用(yòng)←₽¶​。

附件(jiàn)：

1、0.01M  CB ，PH:9.6緩沖液配制(zhì)：取NaHCO3, 0.67g和(hé)Na2CO3, 0.21g加水(∏βshuǐ)到(dào)1L溶解完全即可(kě)，不(bù)用©✔α(yòng)調節PH。

2. 0.067M PBS,  PH:7.0緩沖液配÷♦制(zhì)：取NaH2PO4.2H2O，5.35g和(hé)Na2σ₩HPO4.12H2O, 11.7g以及NaCL，9g加水(shuǐ)1L溶解完全φ✘，末了(le)添加NaOH，0.35g再次混勻後即可(kě)， ≠↔×不(bù)用(yòng)再調節PH。

             ‌™¥↑           HRP快(kuài$ε¶♦)速标記試劑盒 産品使用(yòng)說(shuō)明(míng)書(shū)

在您使用(yòng)本産品前請(qǐng)認真閱讀(dú)說(shuō)明(míng)書(shūε§)，這(zhè)對(duì)您順利完成實驗很(hěn)有(yǒu)<π↓幫助。

産品貨号：6210-0.5MGX2

産品名稱：HRP快(kuài)速标記試劑盒（每次标記量可(kě)以低(dī)到(dào)0.1mg）

原理(lǐ)與應用(yòng)：高(gāo)碘酸鈉氧化(huà)法活化(huà)辣根過氧化(huà)物(wù)酶（HRP）的(de)糖基，經過活化(huà)的(de)HRP帶有(yǒu)醛基可(kě)以與待标記物(wù)的(de)遊離(lí)氨基結合，發生(shēng)希夫堿反★✘應（Schiff's base rea€★ction）。本試劑盒适用(yòng)于帶有(yǒu)遊離(lí)氨基↔∑←的(de)物(wù)質的(de)标記，比如(rú)：帶有(yǒu)遊離≈≠♣₽(lí)氨基（伯胺）的(de)抗體(tǐ)、蛋白(bái)或者小(xiǎo)分(fēn)子(zǐ)化(huàγ♦π)合物(wù)。本試劑盒采用(yòng)特有(yǒu)穩定技(jì)術(s≥♠αhù)，活化(huà)HRP保存在液體(tǐ)中，吸取方便，小(xiǎo)到(dà★πo)可(kě)以标記100ug，讓您的(de)标記工(gō← £★ng)作(zuò)更易把控和(hé)操作(zuò)！

試劑盒組成：

操作(zuò)步驟：

1.  首先去(qù)除待标記抗體(tǐ)或蛋白(bái)中的(de)疊氮鈉、以及含有€↔"(yǒu)氨基的(de)緩沖成分(fēn)物(wù)質，比如(rú∞₹¶>)甘氨酸、Tris 等，還(hái)有(yǒu)EDTA等物(wù)質，可(kě)采用(yòng)透析和(hé)超濾的(de)辦法置換緩沖液，以去♣"©•(qù)除幹擾物(wù)質達到(dào)較好(hǎo)标記效果！透析或超濾緩♠&∏沖液盡量選擇0.01M CB,PH:9.6緩沖液(說(s☆•huō)明(míng)書(shū)附件( ​←®jiàn)有(yǒu)經驗配方無需調整PH），若實✔α驗室沒有(yǒu)碳酸鹽試劑再采用(yòng)0.01M PB§® ↓S（PH:7.0-7.4均可(kě)）透析或超濾置換緩♦φβ沖液，結束後調整抗體(tǐ)或蛋白(bái)的(de)濃度到(dào)2MG/ML。如(rú)果抗體(tǐ)和(hé)蛋白(b≈♣♣ái)不(bù)含上(shàng)述這(zhè)些(xiē)幹擾物(wù)質可(kě)以直接用(β✘yòng)上(shàng)述PBS或CB緩沖液調整濃度到(dào)2MG/ML備用(yòng)。

2.  從(cóng)4℃取出HRP标記試劑盒，使各組分(fēn)充分(fēn)混勻。

3. 取250ul抗體(tǐ)或蛋白(bái)（約0.5mg），加入50ul預活化(huà)HRP(0.5mg)液體(tǐ)中，用(yòng)移液槍反複吹打幾次混勻，混勻後加入HRP标記啓動液54ul（加入啓動液量依據：每10ul蛋白÷×(bái)和(hé)HRP混合液加1.8ul啓動液）繼續混勻數(shù)次 ♥，避免産生(shēng)氣泡。然後避光(guāng)30℃-37℃溫箱偶聯反應2-3小(xiǎo)時(shí)，若遇快(kuài)要(yào)下(xià)班&¥ 也(yě)可(kě)放(fàng)4℃反應24小(xiǎo)時(shí)左右（此法效果一(yī)樣或者更好(hǎo)不(bù)₩σ®必擔心）。

4. 偶聯結束将反應終止液粉管中加入1mL去(qù)離(lí)子(zǐ)水(shuǐ)混勻，取25ul加入3所述反應液中（加入終止液量依據：每1mg HRP加入終止液50ul），充分(fēn)混勻，室溫放(fàng)置1 小(xiǎo)時(shí)或者4℃ 2小(xiǎo)時(shí)。

5. 終止完成後，可(kě)直接加入等體(tǐ)積的(de)标記物(wù)保存液，充分(fēn)混勻，置于-20℃保存。如(rú)果想更上(shàng)長(cháng)期​"的(de)保存建議(yì)先用(yòng)0.067M PBS  PH:7.0（說(shuō)明(míng)書(shū)附件↕∑‌↔(jiàn)有(yǒu)經驗配方）透析或超濾置換緩沖液後再加标記物(wù)保存液。這(zhè)™  ​樣可(kě)以保存3年(nián)左右甚至更長(cháng)。

注意事(shì)項：

1、待标記物(wù)緩沖液成分(fēn)過于複雜(zá)以及含有(yǒu)氨基小(xi‍←&ǎo)分(fēn)子(zǐ)和(hé)NAN3的(de)初始緩沖液必須透析或超濾置換掉，請(qǐ‍‍±ng)采用(yòng)0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可(kě)）或0.01M CB,PH:9.6緩沖液均可(k✘✘$ě)。

2、如(rú)果待标記物(wù)不(bù)是(shì)抗體(tǐ)是(shì)其☆™✘→它蛋白(bái)，那(nà)麽請(qǐng)根據分(fēn)子(zǐ)量參考蛋白(bái)和(h≈αé)酶用(yòng)量：若分(fēn)子(zǐ♣←εΩ)量在40KD以上(shàng)建議(yì)1m∑‌₽‌g蛋白(bái)使用(yòng)1mg HRP；如(rú)果分(fēn)子(zǐ)量在30←σ<↑KD左右，建議(yì)1mg蛋白(bái)使用(yòng) ₩↔1.3mg HRP；如(rú)果分(fēn)子£÷®(zǐ)量在20KD左右，建議(yì)1mg'λ∏蛋白(bái)使用(yòng)2mg HRP；如(rú)果£¥分(fēn)子(zǐ)量在10KD左右，建議(yì)1mg σ∏™蛋白(bái)使用(yòng)4mg HRP；≈"此時(shí)啓動液和(hé)終止液請(qǐng)按步驟3和(π☆hé)4描述标準适量加入；如(rú)果标記量為(wèi)小(xiǎo)于0.5m€✘g的(de)抗體(tǐ)或蛋白(bái)（比如(rú)0.1mg）÷•，HRP和(hé)其它試劑加入量按比例折算(suàn)即可(kě)。♣↓

3、小(xiǎo)分(fēn)子(zǐ)藥物(wù)不(β∞↕bù)建議(yì)直接标記HRP，因為(wèi)HRP的(de)結構不(bù)能(néng)✔'∞↓結合足夠的(de)藥物(wù)會(huì)造成效價偏低(♠®$dī)，這(zhè)種情況建議(yì)先偶聯‍×₹←BSA增加小(xiǎo)分(fēn)子(zǐ)偶聯量再→"✘進行(xíng)HRP标記，這(zhè)樣效果會>✔(huì)非常好(hǎo)。

4、如(rú)果待标記物(wù)含有(yǒu)其它蛋白(bái)需要(yào)把無關蛋白(bái)ε≈↕同樣計(jì)算(suàn)進去(qù)， σ®盡快(kuài)如(rú)此也(yě)請(qǐng)您慎重選擇這(zhè)樣的(de)¶γ樣品進行(xíng)标記。

5、本試劑盒保存4℃可(kě)以保證1年(nián)內(nèi)開(kāi)啓有(yǒu)效，活化(huà)HRP開(k<÷§'āi)啓後小(xiǎo)心取用(yòng)切勿污染∞←>堿性物(wù)質。

6、終止液幹粉一(yī)共2支，原則上(shàng)每一(yī)支配好(hǎo)後僅限一π₩(yī)次性使用(yòng)，因此您可(kě)以根據您的(de)實驗總量合理(lǐ) ∑≈≠配制(zhì)使用(yòng)。

附件(jiàn)：

1、0.01M  CB ，PH:9.6緩沖液配制(zhì)：取NaHCO3, 0.67g和(hé)Na2Cβ∞ 'O3, 0.21g加水(shuǐ)到(dào)1L溶解完全即可(kě)，£→不(bù)用(yòng)調節PH。

2. 0.067M PBS,  PH:7.0緩沖液配制(zhì)：取NaH'©2PO4.2H2O，5.35g和(hé)Na2HPO4.12H2O,'¶γ₹ 11.7g以及NaCL，9g加水(shuǐ)1L溶解完全，末了(le)添加NaO±≈​H，0.35g再次混勻後即可(kě)，不(bù)用(yòng)再調節PH♠→Ω 。