BIOTIN快(kuài)速标記試劑盒 産品說(shuō)明(míng)書(shū)

 在您使用(yòng)本産品前請(qǐng)認真閱讀(dú)說(shuō)明(míng)書(¶&$shū)，這(zhè)對(duì)您順利完成實驗很(hěn)有(y∑§•ǒu)幫助。

産品貨号：6213-50MG

産品名稱：BIOTIN快(kuài)速标記試劑盒

原理(lǐ)與應用(yòng)：本試劑盒提供有(yǒu)預活化(huà)的(de)生(shēng)物(wù)素BIOTIN---NHS，适用(yòng)于帶有(yǒu)遊離(lí)氨基的(de)物(wù)質的(de)标記，比如 ↔(rú)：帶有(yǒu)遊離(lí)氨基（伯胺）的(de)抗體(tǐ)、蛋白(bái)或者化(huà)合物(wù)。本試劑盒采用(yòng)特有(yǒu)穩定技(jì)術(shù‌​)，活化(huà)的(de)BIOTON穩定保存在液體(tǐ)中，吸取使用(yòng)方便，同時(shí)試≥♠φ劑盒組成、配方和(hé)操作(zuò)力求兼顧和(hé)優化(huà)，<&λε讓您的(de)标記工(gōng)作(zuò)變得(de)簡單且更易把控和(hé)↕∑γ操作(zuò)！和(hé)其它試劑盒不(bù)同，本試劑盒還(hái)額外​"‍♦(wài)增加了(le)标記後标記效果所有(yǒu€✘♦∑)核心試劑與實驗指導。

試劑盒組成：

操作(zuò)步驟：

1. 從(cóng)4℃取出BIOTIN快(kuài)速标記試劑盒，恢複室溫（一(yī)般15分(fēn)鐘(zhōng)左右）。

2. 首先要(yào)去(qù)除待标記抗體(tǐ)或蛋白(bái)中的(de)♦​含有(yǒu)氨基的(de)緩沖成分(fēn)物(wù)質，比如(rú)甘氨酸、Tris 等，可(kě)采用(yòng)透析和(hé)超濾（透析袋和(hé)超∑♣δ♥濾管選擇參考附件(jiàn)3）的(de)辦法置換緩沖液，以去(qù)除幹擾物(wù)質達到(dào)好(hǎo)的(ε∞de)标記效果！透析或超濾使用(yòng)待标記物(wù)處 € ☆理(lǐ)液進行(xíng)（将待标記物(wù)處理(lǐ)液幹粉充分(fē'‍∏n)溶解于純水(shuǐ)即可(kě)，每袋配1L無需調節PH。配好(hǎo)<©γ可(kě)存放(fàng)于4℃，3-6個(gè)月(yuè)內(nèi)用(yòng)完），超濾的(de)話(huà)先加上(shàng)蛋白 $÷(bái)同體(tǐ)積的(de)标記物(wù)處理↑><₩(lǐ)液再進行(xíng)超濾，第2次後每次加2倍原蛋白(bái)體(tǐ)積的(de)待标記物‍©(wù)處理(lǐ)液，通(tōng)常超濾4次即可(kěδ€)（遇到(dào)溶解度較低(dī)的(de)蛋€∑φ白(bái)超濾時(shí)可(kě)能(nén♠↔ ←g)因為(wèi)過于濃縮而産生(shēng)聚集堵塞影(yǐn™‌εg)響超濾，這(zhè)一(yī)類蛋白(bái)建議(yì)透析），透析的(Ω&'♦de)話(huà)每次50X-100X體(tǐ)積，一(yī)共4次，✔>每次不(bù)低(dī)于2小(xiǎo)時(shí)γ♦₩，也(yě)可(kě)過夜（12小(xiǎo)時(shí)），過夜時(sh​÷↓ í)請(qǐng)盡量100X以上(shàng)體(tǐ)積，透析請(qǐn€ ☆g)在4℃冰箱進行(xíng)，另外(wài)注意使用(yòng)攪拌透析可&​γ≤(kě)以按2小(xiǎo)時(shí)一(yī)次節省時(shí)間(jiγ​ān)。

3. 然後将抗體(tǐ)或蛋白(bái)的(de)濃度調整到(dào)2mg-5mg/mL之間(jiān)，其它濃度也(yě)行(xíng)但(dàn)是(s₩ ↕φhì)會(huì)影(yǐng)響标記體‍↓↓≥(tǐ)積，需要(yào)注意其對(duì≤ε§)耗材以及緩沖液使用(yòng)規格與量←✘<♣的(de)影(yǐng)響。

4. 按照(zhào)每取100ul抗體(tǐ)加标記啓動液1.5ul後混勻，再按照(zhào)每取1mg抗體(tǐ)或蛋白☆♦‌(bái)加活化(huà)BIOTIN 20ul,加完後迅速混勻開(kāi☆↔±Ω)始進入标記過程，避光(guāng)37℃ 2小(xiǎo)時(shí)反應徹底。

5. 反應結束進行(xíng)超濾或透析（透析袋和(hé)超濾管選擇參考附件(jiàn)3），超濾或透析請(qǐng)使用(yòng)與要(yào)保存的(de)保存液一(yī)緻的(de)♣→♥緩沖液進行(xíng)，推薦使用(yòng)0.01M PBS（PH:7.0，無需調PH的(↕πεde)經驗配方見(jiàn)附件(jiàn)2），一(yī)般超濾的(de)話(huà)需要(y♣®φào)每次反應體(tǐ)積兩倍的(de)緩沖液，通(tōng)常超濾6次即可‌£"∏(kě)（超濾溶解度較低(dī)的(de)蛋白©★₽γ(bái)時(shí)一(yī)定要(yào)注意，可(kě)能(néng)由于離(↑$lí)心濃縮造成部分(fēn)聚集此時(shí)建議(yì)​•>λ透析更科(kē)學），透析的(de)話(huà)每次50X-100X 體(tǐ)積，一(yī)共4次，每次不(bù)低(dī)于2小(xiǎo)​™時(shí)，也(yě)可(kě)過夜（12小(xiǎo)時(shí)），過夜時(shí)請‌λ¶(qǐng)盡量100X以上(shàng)體(t×± &ǐ)積，透析請(qǐng)在4℃冰箱進行(xíng)，另外(wài)注意使用(yò'↕₽ng)攪拌透析可(kě)以按2小(xiǎo)時(shí)一(yī)次節省時(shí)間(jiān÷∏)。

6. 透析結束可(kě)以加上(shàng)防腐劑或保護蛋白(bái)（防腐劑推薦0.1%NAN3或者0.1%PROCLIN-300,蛋白(bái)一(yī)般選擇BSΩ₩ φA，如(rú)果後續實驗加蛋白(bái)有(yǒu)風(f✘←←↑ēng)險請(qǐng)慎重）。如(rú)是(shì)超濾，超濾結束請(q₩•✔ǐng)用(yòng)0.01M PBS（PH:7.0，無需調PH的(de)經驗配方見(jiàn)附件(j★Ω​✔iàn)），按每毫克蛋白(bái)補足到(dào)→ε♣₽0.5ml終體(tǐ)積即可(kě)，防腐劑添加量同透析。一(yī)切完畢後标記物(wù)建議© ¥(yì)-20℃保存，也(yě)可(kě)以短(duǎn)期'‍4℃存放(fàng)。

7. 标記後标記效果測試（請(qǐng)注意标記後不(bù)需要(yào)透析或超濾即可(kě'♥)吸出部分(fēn)标記物(wù)同時(shí)進行(xíng)标記效果測"φ<試）：建議(yì)将标記物(wù)用(yòng)0.01M CB,PH:9.6緩沖液進行(xíng)包被微(wēi)孔闆 ≠ ∞，包被請(qǐng)采用(yòng)倍比α©≥包被，12孔條首孔包被濃度2ug/ml（按投料的(de)蛋白₽∏(bái)和(hé)體(tǐ)積計(jì)算(suàn)濃度），第二孔1ug/ml以此類推∑λ每孔100ul，一(yī)共倍比包到(dào)12孔就(jiù)好(hǎo)。¥₩™37℃包被2-3小(xiǎo)時(shí)或者4℃過夜都(dōu)可(kě)以，包被結束用(yòng)PBST洗一(yī)遍拍(pāi)幹（切記一(yī)定要(yào)•₽洗一(yī)遍），然後加入HRP-SA工(gōng)作(zuò)液100ul/孔，37℃溫育30分(fēn)鐘(zhōng)。溫育結束PBST洗闆5次并拍(pāiσ )幹，加TMB顯色液100ul/孔，37℃溫育顯色20分(fēn)鐘(zhōng)，顯色結束觀察或打印（顯色結束加50ul/孔 γ₩≠2M H2SO4終止，酶标儀單波長(chá£ ∏ng)450nm讀(dú)數(shù)或者雙←φ>波長(cháng)450nm/630nm與450nm/630nm讀(dú)數(↓‍shù)）。不(bù)顯色說(shuō)明(mín♦♥<≥g)沒有(yǒu)标記上(shàng)，顯色說(shuō)明(míng)标₩δ記上(shàng)但(dàn)不(bù)同蛋白→×(bái)标記後效果有(yǒu)所不(bù)同,一(yī)般大(dà)多(duō)數(shù←')蛋白(bái)在标記後按蛋白(bái) λ" 計(jì)包被濃度在16ng/ml時(sh♣£↕ í)，也(yě)就(jiù)是(shì)包被1.6β ‍★ng/孔時(shí)（第8孔）,OD值在2.0左右（因各實驗室ELISA條件(β✔✘jiàn)和(hé)用(yòng)液不(bù)同此結果僅供參考）。

注意事(shì)項：

1. 小(xiǎo)分(fēn)子(zǐ)藥物(wקβù)不(bù)建議(yì)直接标記BIOTIN，BIOTIN标記後的(de)作(zuò)用(yòng​↕')及其有(yǒu)限，這(zhè)種情況建議(yì)先偶聯BSε♠​∑A以增加每個(gè)偶聯物(wù)分(fēn)子(z ∏ ǐ)中小(xiǎo)分(fēn)子(zǐ)藥物(wù)和(¶♣₹hé)BIOTIN的(de)偶聯量，這(zhè)樣§'₽效果會(huì)非常好(hǎo)。

2. 如(rú)果待标記物(wù)含有(yǒu)其它蛋‌σ↓白(bái)需要(yào)把無關蛋白(bái)同樣計(jì)算(suàn)進去(qù)，盡快→↕>¶(kuài)如(rú)此也(yě)請(qǐng)您慎重選擇這(zhè)樣的(de)樣品進行(✘÷xíng)标記。

3. 本試劑盒保存4℃可(kě)以保證1年(nián)內(nèi)開(kāi)啓有(yǒu)效，活化(huà)BIOTIN開(kā'♥i)啓後小(xiǎo)心取用(yòng)切勿污染堿性物(wù)質和(hé)含氨基物(​ ®wù)質，雖然此試劑盒中它被保護的(de)很(hěn)穩定但(dàn)為(w←€↑èi)了(le)避免意外(wài)發生(shēng)也(yě)盡可δ∏↕÷(kě)能(néng)在有(yǒu)效期內(nèi)的(de)3個(gè)月(yuè)內(nèi​ ​)用(yòng)完。

4. 注意透析袋為(wèi)贈品數(shù)量不(bù)能(néng)支持無限次數(shΩ₽ ♦ù)的(de)标記，僅支持大(dà)體(tǐ)積為(wèi)20ML的(de)蛋白(bái)的(de)一(yī)次 φ性标記，更多(duō)次更微(wēi)量的(de)标記實驗請(qǐng)參考附件(jiàn)≠₽∑3使用(yòng)實驗室常規的(de)合适的(de)透析袋或者超‍λ 濾管進行(xíng)。

5. 本試劑盒是(shì)按蛋白(bái)50mg足量标記BIOTIN 2倍的(de)€"₩量準備和(hé)使用(yòng)的(de)活化(huà)生(shēng)物(wù)素，是(shì)α★☆∞為(wèi)了(le)涵蓋客戶各種情況也(yě)能(nén ×g)盡可(kě)能(néng)的(de)确保标記的(de)成功率。也(yě)₩ γ☆就(jiù)是(shì)說(shuō)使用(yòng)中可(kě)以根據實際情況♦∞減少(shǎo)到(dào)說(shuō)明(míng)書(shū)操作(zuò)要(yào)β♦" 求的(de)1/2的(de)BIOTIN用(yòng)量(比如(rú)1MG生(s‌€↔hēng)物(wù)素标記可(kě)以标記20MG的(de)蛋白(bái)也(φ‍£yě)能(néng)取得(de)較為(wèi)∞♠©$理(lǐ)想的(de)結果），減少(shǎo)後可(↔✔kě)以标記更多(duō)的(de)蛋白(bái)。标記試劑盒還(hái)可(kě)以支持ε↑₩€标記量100ug的(de)蛋白(bái)标記。

附件(jiàn)：

1. 0.01M  CB ，PH:9.6緩沖液配制(zhì)：取NaHCO3, 0.67g和(hé)Na2CO3, 0.21g加水(shuǐ)到(dào)φ♠♣✔1L溶解完全即可(kě)，不(bù)用(yòng)調節PH。

2. 0.01M PBS,  PH:7.0緩沖液配制(zhì)：取N☆£λaH2PO4·2H2O，0.49g和(hé)Na2HPO4·12H2O, 2.39>÷→g以及NaCL，9g加水(shuǐ)1L溶解完全即可(kě)，不(bù)用(€ ₩✘yòng)再調節PH。

3. 超濾管和(hé)透析袋的(de)截留分(fēn)子(zǐ)量選擇标準:首先要(yào)小(xiǎo)于蛋白(bái)分(fēn)φ₹子(zǐ)量，原則上(shàng)可(kě)以小₩™(xiǎo)不(bù)能(néng)大(dà)。建議(yì)在蛋白(bái)分(fēn)子(¶£zǐ)量的(de)1/8-1/2之間(jiān)選擇，比如(α$rú)蛋白(bái)分(fēn)質量160K,選擇20K₽φ↕↔-80K的(de)截留量就(jiù)好(hǎo)，根據經驗Ω≈使用(yòng)較多(duō)的(de)透析袋外(wài)部尺寸型号↓‍♣為(wèi)：MD10和(hé)MD34，當然也(yě)可(♠₽kě)以使用(yòng)其它尺寸。

特别提示：如(rú)果您在實驗過程中遇到(dào)任何困難，請(qǐng)在及∑ε♣時(shí)聯系我們技(jì)術(shù)團隊獲取支持。